細胞培養(yǎng)所需的條件:37度的溫度;5%二氧化碳濃度;環(huán)境濕度大于95%;溫度可以通過PID控制;二氧化碳濃度可以通過紅外傳感器進行控制,該怎樣控制濕度呢?
二氧化碳培養(yǎng)箱內通常采用兩種方式控制箱體內濕度。一是采用被動控濕法,即通常的二氧化碳培養(yǎng)箱內均放置一個3L的水盤,內盛3L無菌純水,37度的溫度,水自然蒸發(fā),使箱體內濕度達到95%。二是一些的二氧化碳培養(yǎng)箱,采用主動加濕系統(tǒng)(蒸汽發(fā)生器,加熱水盤,噴霧器等),可以 控制箱體內的濕度,如低溫培養(yǎng)時(低溫二氧化碳培養(yǎng)箱)就需要主動加濕的方法。
水盤污染控制問題:這種高濕度條件下,放置在箱體內部的水盤中的純凈水,很容易造成微生物的滋生,產生污染,導致細胞培養(yǎng)*失敗。
目前,控制水盤內污染的方法有如下幾種:
1、定期(至少每兩周一次),更換水盤內的無菌蒸餾水或無菌去離子水。
2、在水盤內添加適量硫酸銅,配制方法:20g無水硫酸銅+5ml濃硫酸+1L滅菌純水。
3、夏季氣溫高時,水盤里加0.02%的疊氮鈉可以有效的預防真菌污染。
4、水盤內添加適量抗生素。
5、定期為培養(yǎng)箱(含水盤)進行一次高溫滅菌。
6、使用的水盤污染控制試劑,如市面上有些CO2培養(yǎng)箱廠家提供水盤污染控制的銀離子消毒盒,說明書上描述能有效殺滅600中微生物,能持續(xù)使用6個月,但此類污染控制試劑較常規(guī)方法,存在價格較昂貴缺點。采用主動加濕的方式就不存在污染問題。